血型正反定型操作步驟是什么
關(guān)鍵詞：
血型
血型正反定型操作步驟主要包括樣本采集、試劑準(zhǔn)備、正向定型、反向定型、結(jié)果判讀五個(gè)環(huán)節(jié)。
1、樣本采集：
采集受檢者靜脈血2-3毫升置于抗凝管中，離心分離紅細(xì)胞與血清。紅細(xì)胞用生理鹽水洗滌3次配制成3%-5%懸液，血清需56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體。操作需在生物安全柜中進(jìn)行，避免樣本污染。
2、試劑準(zhǔn)備：
準(zhǔn)備抗A、抗B單克隆抗體試劑及A型、B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞。試劑需平衡至室溫，標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞需用生理鹽水洗滌后新鮮配制。檢查試劑有效期及外觀，出現(xiàn)沉淀或渾濁需更換。
3、正向定型：
在標(biāo)記好的玻片或微孔板中分別加入抗A、抗B試劑各1滴，對(duì)應(yīng)加入受檢者紅細(xì)胞懸液1滴，混勻后室溫靜置10分鐘。1000rpm離心1分鐘觀察凝集反應(yīng)，出現(xiàn)顆粒狀凝集為陽性結(jié)果。
4、反向定型：
將受檢者血清與A型、B型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞各1滴在玻片上混合，室溫靜置15分鐘后離心。血清中存在對(duì)應(yīng)抗體時(shí)會(huì)出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，如A型血清應(yīng)凝集B型紅細(xì)胞。
5、結(jié)果判讀：
正向定型顯示紅細(xì)胞抗原，反向定型驗(yàn)證血清抗體，兩者結(jié)果需相互印證。出現(xiàn)不符時(shí)需重復(fù)試驗(yàn)，必要時(shí)采用試管法或分子生物學(xué)方法復(fù)核。記錄凝集強(qiáng)度（1+至4+），最終出具規(guī)范報(bào)告。
操作全程需佩戴防護(hù)裝備，嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作規(guī)范。實(shí)驗(yàn)前后需用75%酒精擦拭臺(tái)面，廢棄標(biāo)本需高壓滅菌處理。定期參加室間質(zhì)評(píng)保證檢測(cè)準(zhǔn)確性，發(fā)現(xiàn)ABO亞型或特殊血型應(yīng)送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)。建議醫(yī)療機(jī)構(gòu)每季度對(duì)操作人員進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化培訓(xùn)，確保血型鑒定結(jié)果可靠。
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