做免疫組化需要注意實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備、操作過(guò)程中細(xì)節(jié)以及染色后的結(jié)果判斷，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，同時(shí)減少操作誤差。
1、樣本準(zhǔn)備注意事項(xiàng)
免疫組化的成功與否，很大程度上取決于樣本的質(zhì)量。
組織固定：標(biāo)本需及時(shí)用合適的固定劑固定，例如10%的中性福爾馬林溶液，避免因固定不完全或過(guò)度固定而影響抗原性。
切片厚度：組織切片厚度一般為3-5微米，太薄易損傷抗原位點(diǎn)，太厚會(huì)導(dǎo)致顯微鏡下染色不清晰。
脫蠟與水化：石蠟包埋組織需完全脫蠟，然后逐步水化，確保染色試劑能夠充分接觸切片組織。
2、實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)
嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)操作可避免影響結(jié)果的干擾因素。
抗原修復(fù)：許多抗體需要進(jìn)行抗原修復(fù)，可以采用熱修復(fù)法或酶消化，但需根據(jù)抗體特性選擇適宜的修復(fù)方法。
抗體選擇與稀釋?zhuān)簝?yōu)選特異性高、靈敏度強(qiáng)的抗體，并根據(jù)說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格稀釋?zhuān)苊獬霈F(xiàn)非特異性染色或背景染色過(guò)深情況。
溫度和時(shí)間控制：孵育過(guò)程中需保持恒溫和合適時(shí)間，過(guò)短或過(guò)長(zhǎng)均會(huì)影響染色效果。
3、染色結(jié)果判斷注意事項(xiàng)
分析染色結(jié)果時(shí)需仔細(xì)觀察，注意減少誤判的可能性。
對(duì)照組設(shè)置：實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照可排除非特異性染色，陽(yáng)性對(duì)照可判斷實(shí)驗(yàn)步驟是否正常。
背景染色清晰度：觀察染色區(qū)域分布和陽(yáng)性信號(hào)強(qiáng)弱，異常信號(hào)需聯(lián)系樣本質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)步驟重新分析。
顯色終止：染色反應(yīng)進(jìn)行到適度時(shí)需終止，防止染色過(guò)深，影響評(píng)估和后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，還需妥善保存常規(guī)實(shí)驗(yàn)記錄，如切片圖片和染色結(jié)果，便于后續(xù)科研和診斷工作使用。規(guī)范化注意這些細(xì)節(jié)能大幅降低失誤，提高染色結(jié)果的可靠性，同時(shí)為疾病分析和研究提供高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。